Protéines Recombinantes sur mesure
Le développement d’outils de criblage haut débit tel que la transcriptomique et la protéomique ont largement contribué à l’identification de gènes candidats, potentiellement impliqués dans les processus biologiques étudiés. En effet, la caractérisation des protéines candidates est fortement associée à la production de protéines recombinantes. La très grande diversité des propriétés des protéines est un obstacle majeur à l’harmonisation des protocoles de production et de purification.
De ce fait, la production des protéines recombinantes demeure un travail laborieux et exigeant en expertise, en temps et en équipement. C’est dans ce contexte que Protenia met tout son savoir et savoir-faire à votre service pour vous aider à avancer dans vos recherches et à vous focaliser sur votre vocation première.
Pour chaque projet de production de protéines recombinantes, le personnel de Protenia examine vos besoins et la finalité de vos projets (étude enzymatique, structure, immunisation) afin de bâtir une stratégie globale (upstream and downstream processes) qui répondra le mieux à vos attentes.
En l’absence de données (bibliographiques et/ou résultats obtenus par le client) nous étudions la faisabilité du projet, optimisons le niveau d'expression et la production de protéine avant d'entamer la production à grande échelle. Vous pouvez nous confier votre projet à différents stades :
- De la séquence du gène à la protéine : nous réalisons toutes les étapes, de la synthèse du gène et du clonage jusqu’à la protéine,
- Optimisation, Production & Purification de la protéine : le gène cloné dans un vecteur d’expression est fourni par le client.
Clonage & Synthèse de Gène
Nous pouvons isoler et cloner le gène d'intérêt par PCR à partir d'ADN ou ADNc fourni. Nous offrons également le service de synthèse de gène pour l'optimisation des codons, la mutagenèse dirigée, etc.
Nous clonons régulièrement dans une large gamme de vecteurs standards, vecteurs d’expression dans E. Coli, levure et cellules d’insectes avec ou sans étiquettes (His, GST, MBP…). Nous clonons aussi dans les vecteurs "exotiques" ou fournis par le client. Le résultat est validé par séquençage.
Pour des besoins spéciaux, les vecteurs peuvent être personnalisés en fonction de vos besoins (Tag, promoteur,…). Chaque construction est validée par séquençage.
Échelle de production de Protéines
Dans tous les cas, pour la caractérisation fonctionnelle et biochimique (activité enzymatique, études structurales, immunisation), nous fournissons des quantités de protéines allant de l’échelle du µg aux grammes.
Dès que les paramètres de purification et de production sont optimisés ou transférés, nous effectuons une production du lot final.
- Production à l’échelle du laboratoire (0,5-5L)
- Production à l’échelle pilote (2-100 L): nous disposons d’un Park de fermenteurs Sartorius qui nous permettent de procéder au scaling-up et de répondre à la plupart des besoins de nos clients.
Purification de Protéines
Notre expertise associée aux équipements appropriés, garantissent la purification dans les meilleures conditions préservant l'intégrité et les propriétés des protéines. Fondamentalement, la purification est basée sur la chromatographie d'affinité. Toutefois, si un grand degré de pureté (polishing) est souhaité, nous associons d’autres techniques chromatographique : échange ionique, filtration sur gel, chromatographie d'interaction hydrophobe. Nous purifions également des protéines non tagguées.
Vous pouvez nous confier vos projets de production ponctuelle ou récurrente :
- d’enzymes recombinants
- antigènes recombinants (kit de diagnostic, ELISA)
- d’anticorps recombinants
- toutes les protéines et peptides recombinants
Les protéines sont exprimées dans différents systèmes procaryote (E. coli) et/ou eucaryote (levure et cellules d’insectes / baculovirus, cytosolique ou secrétée).
Selon vos besoins, nous pouvons livrer des protéines endotoxines free, et des niveaux de pureté >97% pour les études structurales (cristallographie, RMN).
Délais
Les délais de réalisation de chaque étape peuvent varier selon la taille du gène, le système d’expression, la nature de protéine produite, le degré de pureté recherché, etc.
Expression dans E.coli :
| Expression dans E.coli :
|
| Phases |
Etapes |
Délais |
|
Phase A : étude de faisabilité du projet |
synthèse du gène (si clone ou cDNA non disponibles) |
3-4 semaines |
| clonage/sous-clonage |
1 semaine |
| Criblage, test d’expression et optimisation |
1-2 semaines |
| tests de purification, et évaluation du rendement |
1-2 semaines |
|
Phase B : production finale |
Culture, induction et purification |
1-2 semaines |
Expression dans la levure :
| Expression dans la levure :
|
| Phases |
Etapes |
Délais |
|
Phase A : étude de faisabilité du projet |
synthèse du gène (si clone ou cDNA non disponibles) |
3-4 semaines |
| clonage/sous-clonage |
1 semaine |
| Criblage, test d’expression et optimisation |
2-3 semaines |
| tests de purification, et évaluation du rendement |
2-3 semaines |
|
Phase B : production finale |
Culture, induction et purification |
2-3 semaines |
Expression dans les cellules d’insectes (Baculovirus) :
| Expression dans les cellules d’insectes (Baculovirus) :
|
| Phases |
Etapes |
Délais |
|
Phase A : étude de faisabilité du projet |
synthèse du gène (si clone ou cDNA non disponibles) |
3-4 semaines |
| clonage/sous-clonage |
1 semaine |
| Génération de bacmide recombinant |
1-2 semaines |
| Transfection, amplification virale |
2-3 semaines |
| Tests d’expression (MOI, cinétique) |
2-3 semaines |
| tests de purification, et évaluation du rendement |
2-3 semaines |
|
Phase B : production finale |
Culture, induction et purification |
2-3 semaines |
Dans un premier temps, nous réalisons une étude de faisabilité du projet et les mises au point nécessaires (essai de production, évaluation du rendement….)
A l’issue de cette phase A (faisabilité du projet), un compte rendu est envoyé au client.
Les protéines obtenues en phase A peuvent être livrées si le client le souhaite, notamment pour réaliser les premiers tests biologiques. Après validation, nous procédons au scaling-up pour la production du lot final demandé.
En revanche, si les résultats de la phase A montrent que la production de la protéine n’est pas possible selon les stratégies choisies ; la poursuite du projet est alors discutée avec le client :
- soit arrêt du projet,
- soit changement de la stratégie (vecteur, souche, système d’expression, Tag….)
Conditionnement et envoi du produit
Selon les souhaits de nos clients, le produit est envoyé lyophilisé à température ambiante, ou en solution dans la carboglace.
Pour chaque prestation, vous recevrez les produits finaux (plasmides, protéines) accompagnés d’un rapport détaillé de la prestation (images des gels, chromatogrammes, etc.)
Comment obtenir un devis ?
Si vous souhaitez avoir une offre de prix, veuillez:
Pour toute demande d’information, veuillez contacter :
- Mr Laurent L’Hostis: +33(0)6 75 14 84 42 // service commercial en Europe (France)
- Dr. Fikri El Yahyaoui: +212(0)5 35 56 74 03 / +212(0)5 35 86 22 70
responsable projet au Maroc
- ou demandez l'information en ligne
